- Питательные среды
- — субстраты, состоящие из компонентов, обеспечивающих необходимые условия для культивирования микроорганизмов или накопления продуктов их жизнедеятельности
Питательные среды различаются по назначению, консистенции и составу. По назначению их условно подразделяют на две основные группы — диагностические и производственные среды. Диагностические питательные среды включают пять подгрупп: среды для выращивания широкого спектра микроорганизмов; среды для выделения конкретного возбудителя; дифференциальные среды, позволяющие различать отдельные виды микроорганизмов; среды для идентификации микроорганизмов и накопительные среды, предназначенные для обогащения конкретного вида микроорганизмов. К числу производственных относятся П. с. , используемые при промышленном изготовлении медицинских биологических препаратов (бактериальных вакцин, анатоксинов и др.) и контроле их качества. Питательные среды для производства бактерийных препаратов в отличие от диагностических сред не должны содержать вредных для человека примесей и оказывать отрицательного влияния на процесс производства (не препятствуя, в частности, удалению из изготавливаемых препаратов продуктов микробного метаболизма, балластных органических и минеральных веществ).
По консистенции различают жидкие, плотные и полужидкие среды. Плотные и полужидкие питательные среды готовят из жидких посредством прибавления к ним агара или (реже) желатина. Агар-агар — полисахарид, получаемый из определенных сортов морских водорослей. Агар обычно вносят в П. с. в концентрации 1—2% (при изготовлении полужидких сред — 0,2—0,4%), желатин — 10—15%. При t° 25—30° желатиновые среды плавятся, поэтому микроорганизмы на них выращивают преимущественно при комнатной температуре. В качестве плотных сред применяют также свернутую сыворотку крови, свернутые яйца, картофель и среды, содержащие 1,5% силикагеля.
По составу питательные среды делят на простые и сложные. Простые П. с. обеспечивают питательные потребности большинства патогенных микроорганизмов (мясопептонный бульон, мясопептонный агар, бульон и агар Хоттингера, питательный желатин, пептонная вода и др.). К сложным относят специальные среды для микробов, которые не растут на простых питательных средах . Такие среды готовят, прибавляя к простым средам кровь, сыворотку, углеводы и другие вещества, необходимые для размножения того или иного микроорганизма. Сложными П. с. являются и дифференциально-диагностические среды, например среды Гисса с углеводами и индикатором, применяемые для определения видовой принадлежности исследуемого микроба по его ферментативной активности. Некоторые сложные среды, так называемые селективные, или элективные, используют для целенаправленного выделения одного или нескольких видов микроорганизмов путем создания оптимальных условий их выращивания и угнетения роста сопутствующей микрофлоры. Например, висмут-сульфитный агар — строго селективная среда для выделения сальмонелл, агар и среда Левина — слабоселективные среды для выделения энтеробактерий.
В зависимости от состава исходных компонентов различают также среды синтетические, полусинтетические и природного происхождения. Синтетические среды, составные части которых точно известны, и несколько в меньшей степени полусинтетические удобны и используются главным образом для изучения физиологических процессов микроорганизмов. Применение сред такого типа позволяет определить минимальные потребности отдельных микроорганизмов в питательных веществах и, исходя из этого, создать питательные среды , содержащие лишь те соединения, которые необходимы для роста данного микроба. Преимуществом синтетических питательных сред является также их стандартность, однако использование этих сред ограничено из-за высокой стоимости и сложности состава многих из них (нередко они содержат до 40 и более ингредиентов). К тому же они более чувствительны к нарушениям баланса между некоторыми компонентами П. с. , особенно аминокислотами, и размножение микроорганизмов на таких средах легче подавляется избыточной аэрацией или токсическими катионами.
В микробиологической практике продолжают широко использовать среды природного происхождения, химический состав которых известен недостаточно. Основу таких сред изготавливают из различного сырья животного или растительного происхождения: мяса и его заменителей, рыбы, крови животных, казеина, дрожжей, картофеля, сои и др. Вид и качество этого сырья по существу во многом предопределяют питательную ценность и стандартность применяемых основ и в значительной мере самих сред.
Наряду с белковыми основами питательные среды должны содержать зольные элементы (фосфор, серу, кальций, магний, железо) и микроэлементы (бор, молибден, кобальт, марганец, цинк, никель, медь, хлор, натрий, кремний и др.). Эти вещества необходимы для многих биосинтетических процессов у бактерий, однако потребность в них у разных видов микроорганизмов неодинакова. Так, например, марганец и железо требуются для кишечной палочки и возбудителей чумы, а калий — для молочнокислых бактерий. Марганец, кальций, магний, калий и железо стимулируют рост сибиреязвенной палочки, а магний, железо и марганец — рост бруцелл.
Для культивирования многих патогенных микроорганизмов необходимо наличие в среде так называемых факторов роста, представленных прежде всего водорастворимыми витаминами. Хотя бактерии не используют эти вещества как пластический или энергетический материал, тем не менее они являются обязательными компонентами питательных сред, т.к. их отсутствие тормозит образование многих ферментов. Факторами роста могут быть также некоторые органические кислоты, пуриновые и пиримидиновые основания и аминокислоты. Отдельные аминокислоты (L-цистин, D—пироглутаминовая кислота и др.) способны стимулировать рост одних микроорганизмов и, наоборот, угнетать рост других.
Питательные среды должны содержать все необходимые для выращиваемых микроорганизмов химические элементы в легко усвояемой форме и оптимальных количествах. Источником углерода в П. с. обычно служат отдельные углеводы, соли органических кислот, а также углерод, входящий в состав азотсодержащих соединений (белков, пептонов, аминокислот и др.). Потребности в азоте удовлетворяются при наличии в средах нативного животного белка (кровь, сыворотка, асцитическая жидкость и т.п.), пептонов, аминокислот, солей аммония и других азотсодержащих веществ (пуриновые и пиримидиновые основания, мочевина и др.). В питательные среды вносят минеральные соли, необходимые для микроорганизмов. Микроэлементы, требующиеся бактериям в ничтожно малых количествах, обычно попадают в питательные среды либо с водой, которая используется для приготовления среды, либо с сырьем, входящим в состав П. с. Факторы роста поступают в среду с различными диализатами, экстрактами и аутолизатами в виде аминокислот, пептидов, пуриновых и пиримидиновых оснований и витаминов.
Белоксодержащее сырье, используемое для приготовления питательных сред , подвергается гидролизу с помощью различных ферментов (пепсина, трипсина, панкреатина, папаина, грибковых протеаз и т.п.) или кислот (реже щелочей). Целью гидролиза является растворение и расщепление протеина с образованием азотистых соединений, усвояемых микробной клеткой: пептонов, полипептидов, аминокислот, которые входят в состав получаемых таким путем гидролизатов. Для удовлетворения питательных потребностей каждого конкретного вида микроорганизмов используют те или иные гидролизаты в зависимости от их химического состава либо в состав П. с. одновременно вводят несколько гидролизатов в отработанных соотношениях.
Конструируемая П. с. по своему составу и физико-химическим свойствам должна соответствовать условиям естественного обитания микроорганизмов. Различия их питательных потребностей столь многообразны, что исключают возможность создания универсальной П. с. Поэтому современные принципы разработки сред основываются на всестороннем изучении питательных потребностей микроорганизмов.
Необходимо, чтобы питательные среды не только содержали нужные микробам питательные вещества, но и имели оптимальную концентрацию водородных и гидроксильных ионов. Большинство патогенных микроорганизмов лучше растут на питательных средах со слабощелочной реакцией (рН 7,2—7,4). Исключением являются холерный вибрион, оптимум роста которого находится в щелочной зоне (рН 8,5—9,0), и возбудитель туберкулеза, нуждающийся в слабокислой реакции (рН 6,2—6,8). Для предотвращения изменения рН в процессе культивирования микроорганизмов в П. с. добавляют фосфатные буферы — смесь одно- и двузамещенного фосфатов калия, концентрация которых в среде не должна превышать 0,5%.
Питательные среды должны иметь достаточную влажность и быть изотоничными для микробной клетки, что обеспечивает нормальное течение в ней важнейших физико-химических процессов. Для большинства микроорганизмов оптимальной является среда, соответствующая 0,5% раствору натрия хлорида. Одним из существенных требований, предъявляемых к питательным средам , служит их стерильность, позволяющая выращивать чистые культуры микробов.
Важная роль в получении П. с. надлежащего качества принадлежит методам их контроля. Для применяемых в производстве питательных сред главным показателем качества служит эффективность (урожайность) сред, т.е. способность накопления максимального количества биомассы полноценных по свойствам микроорганизмов или продуктов их биосинтеза (токсинов и др.). В оценке диагностических питательных сред ведущим критерием является показатель чувствительности — способность обеспечить рост микроорганизмов в максимальных разведениях культуры возбудителя. В зависимости от назначения питательные среды при оценке их качества используют также и другие показатели — стабильность основных свойств выращиваемых микроорганизмов и скорость их роста, выраженность дифференцирующих свойств и т.п.
При решении вопросов качества питательных сред немаловажное значение придается их стандартизации, чему способствует изготовление сред в виде сухих препаратов. В СССР налажен промышленный выпуск сухих сред разного назначения: простых, селективных, дифференциально-диагностических и специальных.
Библиогр.: Козлов Ю.А. Питательные среды в медицинской микробиологии, М., 1950, библиогр.; Лабораторные методы исследования в клинике, под ред. В.В. Меньшикова, с. 315, 343, М., 1987; Мейнелл Дж. и Мейнелл Э. Экспериментальная микробиология, пер. с англ., с. 46, М., 1967; Микробиологические методы исследования при инфекционных заболеваниях, под ред. Г.Я. Синая и О.Г. Биргера, с. 64, М., 1949; Энтеробактерии, под ред. В.И. Покровского, с. 258, М., 1985.